Encimski imunski test ELISA


Encimski (ELISA) - Sodobna laboratorijske raziskave, v kateri so iskali specifičnih protiteles ali antigenov v krvi na določenih bolezni opredeliti ne le etiologije, temveč tudi fazo bolezni. Rezultati ELISA morda zdi kvalitativno in kvantitativno.

Danes se ELISA uporabljajo v naslednjih primerih:

1) Iskanje specifičnih protiteles proti kateri koli nalezljive bolezni;
2) antigeni iskati morebitne bolezni (nalezljiva Spolne);
3) študija hormonsko stanje pacienta;


4) testiranje tumorskih markerjev;
5) pregled prisotnosti avtoimunskih bolezni.

Prednosti metode ELISA:

1) z visoko specifičnost in občutljivost testa ELISA (nad 90%).
2) Sposobnost za ugotavljanje in sledenje dinamike bolezenskega procesa, torej primerjamo število protiteles v različnih časovnih intervalih.
3) razpoložljivost ELISA diagnostiko v vsakem zdravstvenem zavodu.

Relativno pomanjkanje:

1) Dokaz imunskega odziva (protitelesa), vendar ne patogena.

Osnovni pojmi

Pred pojasniti bistvo metode ELISA, kratko razumejo nekatere pojme.

Protitelesa (imunoglobulini ali - Ig) - Specifične beljakovine, pridobljene z B -
limfociti (imunske celice) v odgovor na hit v telesu nalezljivih povzročiteljev bolezni (virusi, bakterije, glive, itd.) Tam imunoglobulin A (IgA), imunoglobulin E (IgE), imunoglobulina M (IgM), imunoglobulin G (IgG), imunoglobulin D (IgD). So med seboj razlikujejo in tvorijo molekulske mase, z razpolovno dobo, udeležbo / neudeležbo v infekcijski proces, timing odkrivanje po okužbi. Če menimo, da je molekulsko maso, najbolj on IgM - to pentamer (950 000 daltonov), za razliko od drugih Ig (od 150 do 200 000 Da), tako IgM preprosto ne morejo prenesti placento. Zato je odkrivanje IgM v otroškem 1 letu življenja je vedno znak okužbe na plod. Serumskih imunoglobulinov predstavljali glavnino njej IgG (75-85%) in najnižja - IgE (0,003%). Na infekcijski proces samo traja neposredno del IgA, M, G. IgE je znak alergijskih reakcij in bolezni, in IgD - je mogoče najti le v bezgavkah in tonzile tkiva, igra pomembno vlogo pri oblikovanju lokalne imunitete.

Razredi imunoglobulinov

Antigeni - Makromolekulske snovi organskega izvora, vključno z nalezljivim in drugih bolezni, kot tudi različne snovi spremenila celice, sestavljena iz ene ali druge bolezni (avtoimunskih bolezni, onkologije).

Imunski kompleks - Antigen-protitelo kompleks, ki je vključen v imunskem procesu.

Kaj metoda ELISA.

Obstaja več vrst ELISA (neposredni, posredni način blokiranja, konkurenčnega), vendar se v praksi pogosto uporablja heterogeno trdne faze imunskega analizo ali ELISA (encimsko-imunskim testom)

Osnova ELISA imunski odziv, antigen in protitelesa, da se tvori imunski kompleks: antigen-protitelo, ki povzroči spremembo v encimsko aktivnost posebnih oznak na površini protiteles.

Postopek IFA

Preprosto povedano, lahko ta proces je razdeljen na več faz:

1) preizkuševalec površinske luknje tableta zdravnik je prečiščen antigen specifičnih patogenov. Z dodajanjem biološki material (krvnega seruma) je pacient specifične reakcije med antigenom in želeno protitelesa (imunoglobulinov). Ta povezava bo delovala kot "poseben antigen" v naslednji fazi.

2) V tej fazi je tvorba IR (imunskih kompleksov) - reakcijo med "specifični antigen" in konjugata (to imunoglobulina označena s encima peroksidaze). Se doda posebna Kromogen. Rezultat tega encimsko reakcijo je tvorba obarvane snovi v luknjo tablete, intenzivnost barve je odvisna od količine vsebovane v materialu imunoglobulinov bolnikov (protitelesa).

3) Potem, skupni rezultat: fotometryrovanye z večkanalno spektrofotometer, primerjanjem optično gostoto preskusov materiala testnih optične gostote nadzora, matematične rezultatih obdelave. Število protiteles v pacienta odvisen od višine optično gostoto vrtin.

Običajno v praksi, z uporabo 96 vdolbinami.

Pri merjenjem optične gostote (OP) prešteje testne tekočine (ali koncentracija) protitelesa v določenem enoto volumna. Rezultati se nato primerjajo s kontrolnim vzorcem.

Treba je opozoriti:za vsak testni sistem razvil posamezne kazalnike za računovodske rezultate, norm uspešnosti in patologijo (tj "referenčna vrednost"). To je treba upoštevati pri vrednotenju rezultatov vsakega posameznega študija. Napačno interpretirati rezultate enem samem laboratoriju na "referenčnih vrednosti" drugem laboratoriju. Tudi nepravilna primerjati rezultate različnih laboratorijev med seboj.

Pri določanju ELISA reakcije in pomembne koncepte, kot so avidnosti protiteles.
Protitelesa avidnosti - To je moč vezi z antigenom in protitelesom in količino antigen, ki je v povezavi s immnohlobulinami (protiteles). Lakomost je pomembno pri ocenjevanju predviden čas za okužbo, ki je zelo pomembna pri diagnozi primarne okužbe pri nosečnicah.

Osnova testa avidnosti protitelo sestoji iz obdelave imunskim kompleksom (antigen-protitelo) raztopino sečnine, da se uniči protein. Vysokoavidni povezava ostala nedotaknjena in nyzkoavidnyh uničena. Rezultat je podan v obliki indeksa avidnosti, izražena kot odstotek (%).

Katere bolezni se odkrijejo z ELISA diagnostiko?

1. Okužbe
1.1 Virusni hepatitis (IgM, G), B antigeni -HBsAg, HBeAg, protitelesa - IgM HBcorAg, Ig skupno HBcorAg, IgG HBeAg), C (protitelesa Ig M, G HCV), D (IgM, G), E (Ig M, G) in drugi.
1.2 okužba z virusom HIV (IgG)
1.3 Tsytomehalovyrusnaya okužba (protitelesa IgM, G)
1,4 Epstein-Barr, okužba z virusom ali mononkleoz (protitelesa IgM, G EA, VCA, NA proteine ​​virusa)
1.5 herpesom okužba (protitelesa IgM, G)
1.6 Toksoplazmoza (protitelesa IgM, G)
1.7 rdečk (IgM, G)

1.8 Ošpice (IgM, G), bruceloza (IgM, G), pseudotuberculosis (IgM, G), salmonellezom (IgM, G), Shyhellez ali grižo (IgM, G), aspergiloza (IgM, G), klopni meningoencefalitis in boreliozo mnogi drugi.
1.9 parasitosis (LAMBLIOZA, toxocarosis, trihineloza, opisthorchiasis, ehinokokoza, alveokokkoz in drugi), v katerem odkrijejo IgG
1.10 STD (bolezni prenašajo spolno) - mikoplazmoze (IgM, G), ureaplasmosis (IgM, G), Klamidija (IgA, M, G), sifilis (IgG)
1.11 okužba Pylori (IgG)

2. Kazalci avtoimunskih bolezni in človeški imunski parametri (celotni IgE, skupno IgG, skupno IgA, skupno IgM, skupno dekstran sulfat, sekretorni IgA, IgG 2, lgG4,-CEC kroženje imunskih kompleksov, IgA in IgG na gliadin, itd)

3. Onkolohichsekie označevalci (TNF - tumor nekroze faktor, CEA - karcinoembrionski antigen, PSA - prostatspetsyfichnyy antigen hCG - humanega horionskega gonadotropina, CA 125, alveomutsin in mnogi drugi)

4. reproduktivni motnje (estradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP- alfafetoproteyn, FSH - folikle stimulirajoči hormon in drugi)

5. ščitnice (prosta in vezana T3, T4, tiroglobulin, tireoperoksidaze - TPO,-ščitnico stimulirajoči hormon - TSH).

Ta seznam je predstavila ni vse bolezni so diagnosticirali ELISA.

Material za analizo in pravili ograjo ELISA

Najpogostejši material za ELISA reakcij - bolnikovega seruma krvi, odvzetem na prazen želodec. Material lahko služi tudi kot likvorja, plodovnice, steklenih vsebine, materničnega vratu sluzi in sečnici brisi.

Priprava bolnikov za dobavo materiala za ELISA,

Kri se jemlje na prazen želodec. Pred katero koli kri ne potrebujejo, da sprejmejo vse droge. Posebno zdravljenje (protibakterijsko, protivirusno, protyvoparazytarnoe itd), naj se ustavi, najmanj 2 tedna pred študijo.

Pogoji IFA proizvodnja

Encimski imunski material je hitro, čez noč. Zamude so lahko v različnih laboratorijih zaradi kopičenja več serumov.

Možni rezultati ELISA diagnostiko

Pri ocenjevanju rezultatov za posebne okužbe protitelesa pomembna razreda in njihovo število. Na ta ni odvisna samo etiologije okužbe (ali ni), ampak tudi predvidljive faza bolezni (akutno, kronično), in prisotnost aktivne okužbe (akutna ali poslabšanje kroničnega) v času raziskave.

Kaj so približni časovni pojav protiteles (imunoglobulinov - Ig)?

Prvi protitelesa IgM. Prepoznavanje so lahko 1-3 tedne po morebitni okužbi, značilne akutne faze okužbe. Drugi primer je nastanek protiteles IgM - aktiviranje (ali poslabšanje) kroničnega procesa. Protitelesa IgM krožijo v povprečju približno 3 mesece, nato pa se je njihovo število postopoma izgine. Vendar pa pri nekaterih bolnikih se lahko pojavijo v sledeh IgM v 1-2h letih okužbe.

Sodobni sistemi za testiranje z visoko občutljivostjo, ki izhajajo iz napačnih pozitivnih rezultatov, so nespecifični (pogosto pri nosečnicah). Zato se v tej skupini bolnikov pozitivnega IgM treba preskusiti!

Protitelesa IgA pojavijo 2-4 tedne po okužbi, vendar v količini, ki zadostuje za identifikacijo - v mesecu. Serum IgA sintetizirajo plazemskih celic vranice, bezgavke in sluznice, sekretorni IgA, osredotočenimi na sluznico, da opravlja svojo zaščitno funkcijo - sodelovanje v lokalni imunitete.

Od 4. tedna po okužbi se pojavijo protitelesa IgG. Titra večina okužb postopoma povečuje od največ v različnih časih (v povprečju 1,5-2 mesece), nato titer ostaja na nizki ravni in opozarja na imunski sistem. Pri nekaterih boleznih (mikoplazmoze, klamidija, Trihomonozo) raven IgG ni visoka, bistveno zmanjša zaradi pomanjkanja imunitete v teh okužb.

Možnosti za odkrivanje protiteles različnih razredov:

- Izolirani odkrivanje protiteles IgM predpostavlja, da je primarni

okužba.
- Hkratno odkrivanje IgM in IgG krvi značilno za primarno okužbo
V zadnjih 2-3 mesecih, kot tudi poslabšanju kroničnih bolezni. Tako prisotnost IgM v nosečnosti ni vedno znak primarne okužbe.
- Identifikacija izoliranega IgG lahko pove, kako imunost na bolezen,
in kronične okužbe. V drugem primeru je pomembno, in število protiteles (titra) in spremembo titra dinamike. Značilno je, da študije, opravljene v presledkih 2-4-6 tednov.

- Odkrivanje IgA ali IgM izolacijo kažejo primarno okužbo. Na
Videz IgA z IgG pričakovati aktiviranje kronične okužbe (v povprečju 2 tednih od dneva poslabšanje).

Določanje avidnosti protiteles IgG protiteles je odlična dopolnilna faza diagnozo primarni okužbi s staro okužbo, ki ima svoj klinični pomen, še posebej pri ocenjevanju tveganja za intrauterino okužbo ploda. Odkrivanje IgG nyzkoavidnyh kaže primarno okužbo in so v povprečju 4-6 mesecev po okužbi, redko več. Nyzkoavidnyh IgG zahtevajo drugih laboratorijskih dokazov primarno okužbo (IgM). Vysokoavidni protitelo je bodisi znak kronične bolezni in njeno poslabšanje, ali je nastala imuniteta.

Značilnosti pri dojenčkih:otroci do enega leta, včasih pa 1,5 let v materini krvi krožečega IgG proti okužbam (da je bila njihova penetracija skozi posteljico iz matere na zarodek v maternici). To samo po sebi ni znak sedanjosti okužbe. Če so takjm starost IgM (spomnimo, da je materina IgM prodrejo skozi placento ne more), potem je to znak okužbe ploda ali okužbe, pridobljene po rojstvu.

Kvantitativna metoda ELISA

Rezultat diagnostiko ELISA (z uporabo ELISA analizator) se pojavlja v nekaterih enotah:
- Optična gostota (OP) vzorec - koncentracija specifičnih protiteles v enoto volumna. Višje vzorci OP, večja koncentracija protiteles. Nekateri rezultati se nanaša na razmerje pozitivnosti (CP) - to je tudi optična gostota vzorca.
- Enote koncentracije protiteles (nanohramm / mililiter, ali ng / ml).
- V serumu titrov: 01:20, 01:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 in tako naprej. Diagnostični titri (v kateri je bolezen diagnosticirana, in ne dejstvo okužbe) za različne bolezni so različni.

- V obliki simbolov - "+", "-", (+ ++ +++ ++++) "?".
- V okviru kakovostne presoje danega merila (pozitivno ali negativno).

Pravilno oceniti količino odkrivanje protiteles IgG možnosti razreda, zato določeno fazo bolezni in potrebujejo za zdravljenje lahko samo zdravnika.

Ne smemo pozabiti, da je za vsak preskusni sistem s svojimi "referenčnih vrednosti" (pravila variantne), nad katerimi se in diagnosticirajo določene bolezni (variantah patologija) razvil. Pri različnih testnih sistemov "referenčnih vrednosti", so različni.

Pravilni so primerjali rezultate IFA, sprejeti v dinamiki, mogoče le v primeru proizvodnje v istem laboratoriju.