Diagnostika PCR - analiza okužbe


Verižna reakcija s polimerazo (PCR) - zelo natančen način molekularno-genetske diagnostike, ki omogoča osebi, da zaznajo različne nalezljive in dedne bolezni, akutni in kronični fazi in dolgo, preden se lahko bolezen manifestira.

Verižna reakcija s polimerazo (PCR) v letu 1983 razvil Myullisa Cary (ZDA), za katerega je leta 1993 je prejel Nobelovo nagrado za kemijo.

Analiza PCR za večino okužb postal neke vrste "zlati standard". Večina strokovnjakov se soočajo z njim skoraj vsak dan in ne morem predstavljati brez dokončne diagnoze. PCR pogosto postane samo reakcija opredeliti aktivne faze bolezni v tistih trenutkih, ko drugi sploh niso bakteriološko, virološkega, imunološke diagnostične metode.


Prednosti PCR diagnozo v sodobni medicini:

• neposredna detekcija prisotnosti patogena (tj določenih področjih DNA patogenov ali RNA) v vzorcu.
• Visoka specifičnost lahko določi edinstveno odsek DNA ali RNA specifičen za patogen, ki odpravlja možnost lažnih reakcij.
• Visoka občutljivost PCR omogoča odkrivanje še eno celico povzročiteljev bolezni (virusi, bakterije). Občutljivost PCR analizo je 10-1000 celice v vzorcu (npr občutljivosti imunološke in mikroskopskih testov - samo 103-105 celic).

• Razvoj a metod Universal PCR za odkrivanje različnih patogenov. Cilj študije za PCR je genski material (DNK, RNK) parazita. Tehnika se lahko zazna več patogenov iz biološkega vzorca.
• Kar rezultati hitrega testa. Polna raziskava izvedena za 4-4,5 ur, vsaj - nekaj več.
• Sposobnost prepoznati povzročitelje bolezni do pojava simptomov (predkliničnih diagnoza) in po zadnjem bolezni (retrospektiva diagnoza). Primeri predkliničnih diagnoza bodo preverjeni v inkubacijsko dobo (v času od okužbe bolnika pritožb) in latentno okužbo (če sploh, vendar ni nobenih simptomov laboratorijski dokazi - PCR, na primer). Eden izmed vrhuncev je diagnostično PCR PCR v arhivskem gradivu ali bioloških ostankov, ki so pomembne za identifikacijo ali očetovstva.

Trenutno PCR diagnostika je bistveno za razvoj. Tam je izboljšanje metode, čas in še enkrat, obstajajo nove vrste PCR, medicinski trg vstopajo nov testni sistem za te reakcije. Ta strošek-PCR preučuje vsako leto postaja bolj dostopna za široko paleto bolnikov.

Kaj osnovi PCR

Osnova verižne reakcije s polimerazo se ponovi podvoji (pomnoževanje) nekaterih odsekov DNA ali RNA s pomočjo encimov v laboratoriju. Rezultat je količina DNA ali RNA, ki zadostuje za vizualno analizo. Študija se kopira samo del, ki ustreza določenimi pogoji in le v prisotnosti njegovega položaja v proučevanem vzorcu.

Na primer, material za študijo, ki določa prisotnost fragmentov DNA ali RNA patogena (slina, kri, urin, odvajanje od genitalij), ki se nahaja v posebnem reaktorju (Thermocyclers). Ob njej se doda posebne encime, ki se vežejo na patogen DNA ali RNA in sintezo kopij. Ta kopija je le nekaj korakov tipa "verižno reakcijo", in na koncu z eno kopijo genskega materiala lahko povzroči več sto ali tisoč izvodih. Sledi analiza in primerjava rezultatov z dostopno bazo podatkov o strukturi različnih patogenov. PCR ne more samo ugotoviti vrsto patogena, ampak tudi, da bi količinsko rezultat analize, tj toliko patogenov pri ljudeh.

PCR se zdaj širi paleto možnosti študija: uvedbo mutacij, fuzija fragmentov DNA in razširjen v medicini, na primer vzpostavitev očetovstva, pojavljanje novih genov in več.

Kaj okužbe se lahko ugotovi z diagnostiko PCR

1) HIV (lahko odkrije virus človeške imunske pomanjkljivosti HIV-1)
2) Virusni hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNA HBV, HCV RNA, RNA HGV)
3) infekcijske mononukleoze (virus DNA Epstein-Barr -VEB)
4) okužba Tsytomehalovyrusnaya (DNK-CMV)

5) okužba herpesa (herpes simpleks virus DNA HSV 1 in 2)
6) SPO (okužbe, spolno prenosljive okužbe) - ureaplasmosis, gardnerellez, klamidija, mikoplazmoze, Trihomonozo,
7) Tuberkuloza (Mycobacterium tuberculosis)
8) onkogeni virusi - virusna infekcija (humani papiloma virus (vključno z njegovimi onkogenih tipov 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, in 59)
9) borelioza, klopni meningoencefalitis
10) Listerioza
11) kandidoze (glive iz rodu Candida)
12) okužba Pylori (Helicobacter pylori)

in druge

Glede na razpon patogenov PCR diagnostika se pogosto uporabljajo v ginekološki, urološke prakse, prakse, nalezljive bolezni, v pulmonology, tuberkuloze, gastroenterologije, hematologije, onkologije in drugih.

Material za študij in pravili ograjo

Gradivo za študijo PCR, ki lahko zazna bakterije tuje DNK ali DNA ali RNA lahko služijo različnih bioloških tekočinah in okoljskih pravic: sluz, urin, kri, sputum, nastrga epitelnih celic, tkivo placente, kri, sok prostate, plodovnice, plevralne tekočine.

Izpit za okužbe, spolno prenosljivih okužb (SPO) med moškimi in ženskami vzpon izcedek iz spolovil tamponom ali strganje iz materničnega vratu, strganjem ali bris sečnice (sečnice), urina.

Izpit za okužbe (okužba herpes, CMV, mononukleoza, toksoplazmoza, hepatitis B in C, okužba s HIV) PCR v krvi sprejeti.

Za diagnozo infekcijske mononukleoze, CMV, herpes okužba grla tamponom se vzame za testiranje za CMV - urinu. Pogosto za anketo o živčnega sistema v številnih študijah, sprejetih cerebrospinalno tekočino.

V Pulmologija materiala je izpljunek, plevralni tekočini.

Izpit za intrauterino okužbo - plodovnice, posteljice tkiva.

Priprava na depozitni materiala in diagnostiko PCR

Skoraj vsi bolniki, ki so opravile PCR diagnostiko, računajo na zanesljivih, točnih in hitrih rezultatov, ki so v veliki meri odvisna od sposobnosti v laboratoriju, strokovnih laboratorijskih zdravnikov. Marsikdo pa ne mislim, da je to verodostojnost v veliki meri odvisno od nas, in sicer priporočila lečečega zdravnika, življenjski slog in natančno zbiranje gradiva. Pri zbiranju materialnih potrebnih pogojev, ki preprečujejo kontaminacijo (onesnaženost), materiala in zato dvomijo v objektivnost analize.

Pravilna priprava za dovajanje materiala ne predstavlja veliko težav. Naslednja priporočila zdravnikov za bolnike:

1) so bili spolno aktivni dan za dostavo materiala;
2) za študij v krvi pojavi zjutraj na prazen želodec (ne jesti, ne piti);
3) ob urin zbrani v jutranjem delu prvega čisto sterilno posodo.

Pogoji pripravljenost analiza PCR

Končni rezultat je pripravljena 1,5-2h dneh po dostavi materiala. V nekaterih primerih, rezultat je pripravljen na prvi dan.

Razlaga PCR

Negativno Rezultat PCR kaže, da se preskusni material v času dostave ni mogoče najti nobene sledi okužb. Večina primerov ne kaže okužbo, ki je skušal najti v vzorcu študija.

Positive PCR opozarja, da bi se odkrilo znake okužbe v študiji o biološki vzorec. Z veliko natančnostjo pozitiven rezultat kaže na prisotnost okužbe v danem trenutku.

Obstajajo primeri, ko PCR zaznani pozitivni za aktivno okužbo in ne more govoriti - tako imenovani "zdravo prevoznik" in brez kliničnih znakov bolezni, ki ne zahteva zdravljenja, vendar zahteva spremljanje zdravnik. Obstaja več v številnih virusnih infekcij (HPV, CMV, EBV okužba, okužba herpes, itd) materialov, kot so slini, strganju materničnega vratu, sečnice, tj lokalni pozornost. Toda ne smemo pozabiti, da prenos medija na voljo pri zdravih ljudeh kot prehod v kronično obliko bolezni s postopkom aktiviranja. Če PCR pozitivne krvi, to ni prevoznik in zahteva posebno obravnavo.

Kvantitativni PCR je ocenil zdravnik individualno za posameznega okužbe ločeno in se ne delijo prehode. Na podlagi kvantitativne PCR zdravnik lahko ugotovi stopnjo aktivnosti okužbe in nastavite stopnjo bolezni, ki vsekakor vplivajo na potek in namen odmerke zdravil.

Ena izmed zadnjih zanimivih vprašanj: kako natančno PCR diagnoza?

Za PCR analizo, obstajajo 3 opredelitve:

1. Točnost (z veliko verjetnostjo lahko prepozna ali odsotnost okužbe).

2. specifičnost (natančnost odkritja posebno okužbe).
3. Občutljivost (čeprav majhno vsebnostjo genskega materiala patogenov v vzorcu zazna okužbe).

Verižna reakcija s polimerazo praktično ne daje lažnih alarmov (tj ni nobenih pozitivnih testov, če ni okužbe). Lažno negativni rezultati so redki (pogosto je to posledica pomanjkanja aktivne okužbe pri ljudeh v trenutku). Na primer, latentna infekcija, kronične okužbe zunaj aktivnost.